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酵母细胞壁结构复杂，用一般的裂解液很难破壁。使用Trizol等试剂提取酵母RNA，也只能获得5s rRNA。本试剂盒采用蜗牛酶与裂解液（Buffer Rlysis-Y）共同作用，10分钟有效破碎酵母细胞壁。不会造成机械破壁中的RNA损伤，确保RNA的完整性。再通过Buffer YCA纯化、乙醇沉淀等步骤，可获得高浓度的RNA。

从1mL过夜培养的酵母菌液中可获得10～20μg总RNA。获得的RNA OD260/OD280比值一般为2.0左右，可直接用于RT-PCR、Northern Blot、斑点杂交等实验

• 自备试剂：无水乙醇、75%乙醇、酚:氯仿（体积比为25:24，pH4.5）、氯仿、DEPC等。
  
• 提前将水浴锅调至37℃备用。
  
• Snailase比较难溶解，请提前将Snailase加入Snailase Storage Buffer，涡旋混匀使酶溶解，如溶解不完全，可以将Snailase置于冰箱4℃过夜溶解。待完全溶解后分装，-20℃冰箱保存备用。

• 取1mL过夜培养的酵母菌液，加入1.5mL RNase-free离心管中，室温10000rpm离心1min，彻底弃掉培养基，收集菌体。
  
  • 1mL过夜培养的酵母培养物离心收集，湿重约为20mg。
    
  • 收集菌体后可用500μL DEPC-treated ddH2O漂洗一次，10000rpm离心1分钟，弃上清，进一步去除残留的培养基。
• 按每20mg菌体湿重取600μL Snailase Reaction Buffer加入步骤1中的离心管，同时加入50μL实验前准备好的Snailase，混匀，37℃水浴5min。4℃ 10000rpm离心2min，弃上清。
  
• 立即加入400μL Buffer Rlysis-Y震荡混匀，65℃水浴5min。
  
• 将离心管取出，冰浴5min后加入200μL Buffer YCA，混匀，12000rpm 4℃离心5min，取上清。
  
• （可选）向上清液中加入等体积酚:氯仿（体积比为25:24，pH4.5），混匀。12000rpm 4℃离心5min，取上清液。
  
  • 此步骤可提高RNA的纯度和得率。
• 向上清液中加入等体积氯仿，混匀。12000rpm 4℃离心5min，取上清液。
  
• 加入上清液1/3体积的无水乙醇，混匀，室温放置3min，12000rpm离心5min，小心倒掉上清。
  
  • 加入无水乙醇混匀后，-20℃放置5～10分钟可提高RNA的得率。
• 用700μL的75%乙醇（请用DEPC-treated ddH2O配制）洗涤沉淀，12000rpm 4℃离心3min，小心倒掉上清。
  
• 重复步骤8一次。
  
• 室温倒置10min，尽可能使离心管中残留的乙醇彻底挥发。加入50μL的DEPC-treated ddH2O溶解沉淀，立即使用或-70℃长期保存。
  
  • 如果残留的乙醇有挂壁现象，倒掉液体后再短暂离心，将残液用移液器吸出。然后开盖室温放置5～10分钟至残留的乙醇完全挥发。
    
  • 吸取残液时注意不要将RNA沉淀取出，避免RNA损失。